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Reversed Phasen Chromatographie (RP)
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| Hier wird der Mechanismus der NP Chromatographie umgedreht. Daher die Bezeichnung Reversed Phase oder Umkehr Phase.
Zur Herstellung der stationären Phase werden Silane, welche mit langkettigen Kohlenwasserstoffen substituiert wurden, mit einem polaren Trägermaterial (z.Bsp Silica) in Reaktion gebracht. Die polare Oberfläche des Trägermaterials wird mit einer apolaren Schicht von Alkanen überzogen. Somit wird die Polarität umgekehrt (engl. reversed). Als mobile Phase wird meist eine Mischung aus Puffer und Wasser und Methanol oder Acetonitril verwendet. In der RP Chromatographie gibt es eine Vielzahl stationärer Phasen.
Die gängigste Phase gelten die C18 bzw. ODS (Octadecyl) Phasen. Aber auch C8 (Octyl) und C4 (Butyl) Phasen werden oft eingesetzt, wenn die C18 Phase für die Trennung zu hydrophob ist.
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C18, C8 & C4
C* steht für Anzahl Kohlenstoffatome in der Kette, welche an das Trägermaterial gebunden wurde (z. Bsp. C18 = 18 Kohlenstoffatome). Diese Ketten stehen bürstenförmig von der Oberfläche ab. In welcher Dichte das Trägermaterial mit Kohlenwassserstoffketten belegt ist, ist von Phase zu Phase unterschiedlich und wird in der Regel von den Herstellen in % angegeben. Meistens bewegt sich die Dichte zwischen 13 - 16 %.Endcapping
Als Endcapping bezeichnet man das Abdecken der übriggebliebenen freien Silanolgruppen. Dies kann auch mit polaren Gruppen geschehen, mit dem Ziel der hydrophoben Phase einen polaren Charakter zu geben. Ein weiterer Effekt des polaren Endcapping ist, dass solch eine Phase mit 100 % Wasser verwendet werden kann, ohne dass die Kohlenwasserstoffketten kollabieren.
Trägermaterial
Als Trägermaterial wird meistens Silica verwendet. Silica wird jedoch im sauren Millieu angegriffen und im stark basischen Bereich lösen sich die Kohlenwasserstoffketten ab. Dies schränkt den pH Bereich in dem Silica Phasen eingesetzt werden können ein, oft liegt er nur zwischen 2.0 - 7.5. Man versuchen, diesem Effekt entgegen zu wirken, indem man das Silica selbst und die Bindungstellen mit Querverbindungen zwischen den C-Ketten oder mit hoher Belegung schützt.
Polymer Phasen
Eine gute Alternative bieten Polymerphasen (RSpak, Asahipak). Hier wird als Trägermaterial ein Polymer eingesetzt. Diese Säulen sind im sauren wie auch im basischen Bereich sehr robust und langlebig.
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Polymer Phasen
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zur Trennung von:
Aliphatischen Alkoholen, Aminosäuren, Cyclodextrin, Proteinen, Peptiden, Oligosacchariden, Pharmazeutika
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zur Trennung von:
Aminosäuren, Proteinen, Peptiden
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Silica Phasen
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Die HALO Säule ermöglicht die schnelle Trennungen wie in der UPLC, doch bei "normalem" Druck unter 400 bar und mit herkömmlichen HPLC Anlagen.
Eine schnellere Trennungen erreicht man durch kleinere Partikel in der Säule. In kleineren Partikeln ist der Diffusionsweg durch die Poren kürzer und damit die Peakverbreiterung geringer. Damit können schnellere Flussraten gefahren werden wodurch sich die Analysenzeiten verkürzt. Leider erhöht sich der Druck massiv, so dass für "schnellen" Säulen mit 1,7 µm Partikel spezielle UPLC Anlagen benötigt werden, die sowohl im Betrieb als auch schon in der Anschaffung teuer sind.
Die HALO Säule basiert auf der bekannten Fused Core Technologie. Auf einen soliden Silikakern mit ø 1.7 µm wird eine poröse 0.5 µm Schicht "aufgeschweisst". Der kürzere Diffusionsweg der HALO Partikel reduziert die axiale Dispersion der Probe und minimiert die Peakverbreiterung. Ein HALO Partikel hat einen Diffusionsweg von nur 0.5 µm verglichen zum Diffusionsweg von 1.5 µm bei einem voll porösen 3 µm Partikel. So kann mit schnelleren Flussraten gefahren werden. Dadurch generiert die Halo Säule mehr Trennkraft und so kann diese entweder für schnellere Analysen oder bessere Trennungen verwendet werden.
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weitere Silica Phasen
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Das Multitalent für die RP Chromatographie
zur Trennung von:
basischen und sauren Substanzen, Peptiden, Proteinen, pharmazeutischen Antibiotika, wasserlöslichen Vitaminen, usw.
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wie Monitor mit leicht unterschiedlicher Selektivität
zur Trennung von:
Antibiotika, Barbiturat, Chemotherapeutika & weiteren Pharmazeutika, Proteinen, Peptiden, sauren & basischen Substanzen
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Die Spezialistin bei heiklen Trennungen
zur Trennung von:
Aminosäuren, basischen Substanzen, fettlöslichen Vitaminen, Metaboliten, Peptid Mapping, Pharmazeutischen Produkten, sauren Substanzen
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zur Trennung von:
freien Fettsäuren, Komplexbildner, Proteinen, Peptiden, Soft Drink Analysen, Trizyklischen Antidepressiva, Vitaminen, etc.
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© infochroma ag, Sumpfstrasse 3, CH-6300 Zug; Tel: +41 41 748 50 60, info@infochroma.ch
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Polymer Phasen
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Silica Phasen
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