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Reversed Phasen Chromatographie |
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Normalphasen Chromatographie (NP)In der NP Chromatographie werden als stationäre Phase vor allem polare Stoffe wir Silica Gel und Aluminiumoxid eingesetzt und als mobile Phase unpolare bis mässig polare organische Lösungsmittel oder Gemische. Der Trennmechanismus beruht auf einer
Konkurrenz zwischen mobiler Phase und den Stoffen, die sich um die aktiven Stellen der festen Oberfläche der stationären Phase gruppieren. Die Trennung der Stoffe wird in erster Linie von den Dipol Momenten und Flächen der aktiven Stellen bestimmt.
NP Chromatographie wird heute vor allem noch in der Preparativen Chromatographie angewendet. Mit NP Chromatographie können
alle Substanzen, welche sich in un- bis ganz leicht polaren Lösemitteln lösen lassen, getrennt werden.
NP Phasen können aber auch in der RP, SEC und IC Chromatographie eingesetzt werden.
Typische NP Phasen:
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| Silica |
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Die Silicaoberfläche weist Silanolgruppen auf. Diese formen die aktiven
Zentren, welche mit der zu trennenden Substanz in Dipol-Dipol
Wechselwirkung (Adsorption) treten.
ideal zur Trennung fettlöslicher Vitamine, kleiner organischer Moleküle,
Pharmazeutika, etc
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Funktionelle Gruppe:
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keine |
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Wechselwirkung:
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Dipol-Dipol, Wasserstoffbrücken, Pi-Komplexe |
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pH:
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4-9 |
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Cyano
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Die Silica Oberfläche ist mit polaren Komponenten (Cyano) derivatisiert .
zur Trennung von geladenen, unpolaren und mittelpolaren Substanzen: Tetracyclin, Steroiden, organischen Säuren, Peptiden, Proteinen, Kationentauschern
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Funktionelle Gruppe:
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Cyano |
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Primäre Wechselwirkung:
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polar/unpolar
(weniger polar als Silika, ähnlich Struktursensibel) |
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Sekundäre Wechselwirkung:
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Kationentauscher |
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Diol
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Die Silica Oberfläche ist mit Diol derivatisiert. Dies führt zu einer speziellen Selektivität für Substanzen mit Doppelbindungen (Azofarbstoffe).
zur Trennung von Azofarbstoffen, Peptiden, Proteinen und Malto-Oligosacchariden
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Funktionelle Gruppe:
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Diol |
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Primäre Wechselwirkung:
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polar/unpolar
(ähnlich Silica, bei gleichem Eluent kleinere k’ Werte, polare RP Phase) |
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Sekundäre Wechselwirkung:
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Kationentauscher |
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Amino/ NH2
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Die Silicaoberfläche ist mit Amino-Propyl Silan derivatisiert. Diese Phase ist
im NP-, RP- und schwachen Anionen-Modus einsetzbar.
zur Trennung von Kohlenhydraten und Oligosacchariden
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Funktionelle Gruppe:
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Tri Ethoxy Amino Propyl Silan |
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Primäre Wechselwirkung:
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polar, Anionenaustauscher (H+ - Akzeptor) |
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Sekundäre Wechselwirkung:
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Unpolar, Kationenaustauscher (H+ - Donator) |
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pKs
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9.8 : chemisch aktiv |
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