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Chromatographie à phase inverse (RP)
Contrairement à la chromatographie de NP, en chromatographie à phase inverse la phase stationnaire est non polaire et la phase mobile modérément polaire. Les molécules qui sont plustôt non polaires en nature ont une rétention allongé et des molécules polaires s'éluent plus rapidement. Pour la phase stationnaire ont utilise plutôt silice sur lequel on a greffé des fonctions chimiques, le plus souvent de chaines alkyles à 18 atomes de carbones ou ODS (Octadecyl). Mais également les phases C8 (Octyl) et C4 (butyliques) sont employées souvent quand la phase C18 est trop hydrophobe. Selon le taux de greffage, on obtient une plus ou moins grande résolution. |
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C18, C8 & C4
C* montre le nombre d'atomes de carbones dans la chaîne qui est greffée sur la phase stationnaire (par exemple C18 = 18 atomes de carbone). Ces chaînes sont attachées à la surface comme le poil à une brosse. La densité des chaînes de carbone greffées sur la phase stationnaire varié de phase à phase et est habituellement indiqué en % par le producteur. Le plus généralement la densité se trouve entre 13 - 16 %.
Endcapping
Les fonctions silanols engendrent des résultats non reproductibles surtout pour le molécules basiques. Pour éviter cela, on recouvre le surface généralement avec un fonction méthyle; le résultat les fonctions silanols ne sont plus libres. Ce processus s'appelle "end-capping".
phase stationnaire
Comme phase stationnaire on utilise plus souvent silice. La silice cependant corrode dans environs acide et les chaînes de carbone sont détachés dans un environs alakalin forte. Ceci réduit la gamme de pH d'une phase de silice et souvent il est entre 2.0 - 7.5.
Phase de polymère
Un bon aternative est la phase de polymère (RSpak, Asahipak). Ces colonnes ont le polymère comme phase stationnaire et sont très robustes dans des environs alkalins et acides.
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Phase Polymère
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pour le séparation de:
Alkohols aliphatique, acide aminé, Cyclodextrine, protéine, peptide, oligosaccharide, drogues
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pour le séparation de:
Acide aminé, protéine, peptide
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Phases Silice HALO
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La colonne de HALO permet la séparation rapide comme dans l'UPLC mais avec une pression « normale » de moins de 400 bar et avec les systèmes réguliers de HPLC
Afin de permettre des séperations plus rapides, des colonnes sont emballées avec de plus petites particules. Dans de plus petites particules le chemin de diffusion dans et hors de la particule est plus court et l'élargissement des pics est réduit. Ceci permet des débits de phase mobile plus rapides ce qui réduit le temps d'analyse. Malheureusement la contre-pression est massive, de sorte que les colonnes rapides modernes avec 1.7 µm de particule nécessitent des systèmes spéciaux d'UPLC qui sont chers non seulement le prix d'achat mais aussi l'opération.
Une alternative connue est la technologie où une couche poreuse de particules de 0.5 µm est fondue à un noyau de silice de 1.7 µm. Le chemin de diffusion plus court des particules de HALO réduit la dispersion axial des echantillons et réduit l‘élargissement de pic au minimum. Une particule de HALO a un chemin de diffusion de 0.5 µm comparé au chemin de diffusion de 1.5 µm d‘une particule totalement poreuse de 3 µm. Ainsi la colonne de HALO développe plus de puissance de séparation et peut être employée pour une analyse plus rapide ou pour plus de puissance de séparation.
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d'autres Phases Silice
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Le multi-talent pour la chromatographie de RP
pour le séparation de:
basischen und sauren Substanzen, Peptiden, Proteinen, pharmazeutischen Antibiotika, wasserlöslichen Vitaminen, usw.
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comme le moniteur mais avec une sélectivité légèrement différente
pour le séparation de:
Antibiotiques, Barbituraet, Chemo et d'autres drogues, substances de protéine, de peptide, acides et alkalines
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e spécialiste pour des seperations critiques
zur Trennung von:
Acide aminé, substances alkalines, vitamines solubles en graisse, métabolite, Peptid traçant, drogues, substances acides
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zur Trennung von:
acides gras, agent complexant, protéine, peptide, analyse de boisson non alcoolique, Tricyklic Antidepressiva, vitamines, etc
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