Chromatographie NP/RP

NP = chromatographie à phase normale (NP = Normal Phase)
RP = chromatographie à phase inverse (RP = Reversed Phase)

Au début de la chromatographie le gel de silice a été employé comme phase stationnaire. Il était bon marché de produire, relativement inerte et il a une superficie élevée. Le gel de silice a été produit à partir du silicate de sodium par l'hydrolyse et la dessication. La phase stationnaire s'est composée de particules de gel de silice du 10 - 30 µm.

Au début des années 70s, une manière de produire le gel speric de silca a été découverte. En raison de la forme ronde de la silice speric, les colonnes ont pu être emballé plus serrées parce que les particules adaptées mieux l'un dans l'autre. Ceci a permis un écoulement plus régulier de la phase mobile. La composition des partcles a égalmement pu être controllé meilleure. Des particules de 5 µm et 3 µm ont pu être produites. Ceci a augmenté l'efficacité des colonnes mais également la contre-pression.

Egalement dans des années 70s, les les phases collés sont apparu, cela veut dire des groupes de liphophiles sont attachés à la surface de gel de silice ce qui produit le gel de silice de phase inverse. La phase devient apolaire et hydrophobe

La différence entre la chromatographie de phase normale et de phase inverse
La chromatographie de phase normale (NP) emploie une phase stationnaire polaire et une phase mobile apolaire. L'analyte polaire, qui diffère dans la polarité de la phase stationnaire, s'associe avec la phase stationnaire et en conséquence est retenu. Avec une polarité de la phase mobile la plus grande, le temps d'élution augmente. Les molécules apolaires s'éluent plus rapidement tandis que des molécules polaires sont retenus.

Avec le développement des colonnes à phase renversée, la chromatographie de phase normale est devenue moins populaire en raison du manque de reproductibilité. Récemment, cependant, il est devenu utile encore avec le devolopment des phases collées par HILIC.
Les colonnes HALO ont une phase de RP. En raison de la technologie qui fond une couche poreuse à un noyau de silice, la phase de HALO permet une séparation rapide comme connu de l'UPLC mais avec une pression « normale » de moins de 400 bar et avec les systèmes réguliers de HPLC.
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En chromatographie à phase inverse (RP) la phase stationnaire est apolaire et hydrophobe. Pour la production d'une phase stationnaire apolaire, on a greffé sur les particules de silice des chaînes alkylées (le plus souvent de chaines alkyles à 8 ou 18 atomes de carbones ou autres selon la polarité recherchée au niveau des groupes silanols (end-capping).

Contrairement à la NP, le temps de rétention est plus long pour les molécules qui sont apolaires en nature, permettant aux molécules polaires de s'éluer plus rapidement. Comme phase mobile, les composés de polare tels que l'eau et l'acétonitrile sont utilisés généralement.

Pour un seperation isocratic la composition de la phase mobile n'est pas changée pendant le seperation.

Pour un seperation de gradient la composition de la phase moible est changée pendant le seperation. C'est la technique la plus courante de nos jours.
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